CRISPR/Cas9介导敲除小鼠成纤维细胞MMP-2基因

作者：接金磊; 迟良; 张青青; 李鹏辉; 刘焕奇^*

来源：中国兽医杂志, 2019, 55(06): 110-137.

• CRISPR/Cas9
• MMP-2基因
• 载体构建
• 敲除

MMP-2与蹄叶炎的发生密切相关。本试验通过http://chopchop.cbu.uib.no/网站设计MMP-2的sgRNA,将sgRNA的合成物连接到经Esp3I限制性内切酶切割的lenticrispr v2载体上,构建完整敲除载体;并将该载体转染到小鼠成纤维细胞中,通过Western Blot检测MMP-2蛋白表达量。经菌液PCR鉴定和PCR产物测序表明载体构建成功;Western Blot结果显示,基因敲除组的MMP-2蛋白表达量明显降低,表明成功敲除小鼠成纤维细胞中MMP-2基因。为进一步在细胞层次研究MMP-2基因对蹄叶炎作用及机理提供了条件。

• 单位
  青岛农业大学