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摘要
建立一种恒温隔绝式PCR（Insulated isothermal PCR， iiPCR）检测食品中金黄色葡萄球菌的方法。本实验根据nuc基因设计特异性引物、探针，并探索针对食品样品快速提取金黄色葡萄球菌模板DNA的方法；通过优化引物、探针以及模板的用量，对iiPCR的特异性、灵敏度、稳定性进行评价，并利用该方法和传统PCR方法对人工污染样品和实际采集食品样品中的金黄色葡萄球菌进行检测和比较。结果表明：水浴法因操作简便、耗时短、仪器要求不高，适合快速提取模板DNA；建立的iiPCR具有特异性强、灵敏度高、稳定性好的特点，且与其他菌无交叉反应；对人工污染猪肉样品和牛奶样品中的金黄色葡萄球菌，iiPCR方法可在6 h完成检测，检测限为103 CFU/mL和 102 CFU/mL，传统PCR方法8 h后完成检测，检测限为105 CFU/mL；针对实际采集的食物样品，验证实验表明iiPCR方法在6 h时的检出结果与传统PCR在12 h以及传统培养方法16 h时的检出结果一致。证明建立的iiPCR方法能够更快速准确检测食品中金黄色葡萄球菌。
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