非洲猪瘟TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作者：杜楠楠; 高飞; 姜一峰; 郑浩; 童武; 李国新; 张宽; 张玉娇; 黄剑; 童光志^*

来源：中国兽医科学, 2020, 50(04): 423-429.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0054

• 非洲猪瘟病毒
• p17蛋白
• D117L基因
• 实时荧光定量PCR

为建立检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的快速诊断方法,本研究根据ASFV SY18株p17蛋白的编码基因D117L的保守序列设计并合成引物和探针,建立了基于ASFV p17蛋白的编码基因D117L的TaqMan荧光定量PCR检测方法,并验证其特异性、灵敏性和重复性。结果显示,本研究建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法的Ct值与标准品在1×109～1×101copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-3.192,检测下限为10 copies/μL,且与其他能引起相似症状的猪源病毒无交叉反应。重复性试验结果显示,组间与组内变异系数均小于1.920 7%,重复性好。此方法可用于ASF的早期诊断和ASFV快速检测。

• 单位
  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 中国农业科学院上海兽医研究所; 动物科学学院; 扬州大学; 福建农林大学