5-氮-2′-脱氧胞苷对人肠癌细胞侵袭性研究及机制探讨

作者：方晓明; 邵银灿; 郭胜才; 娄敏峰; 王喜; 姚宁^*

来源：实用医学杂志, 2020, 36(11): 1447-1451.

• 结直肠肿瘤
• 5-Aza-CdR
• INK4家族基因
• 侵袭

目的探讨特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对人肠癌RKO细胞迁移、增殖侵袭能力的影响及对INK4家族基因(p15ink4b及p16 ink4a/CDKN2)蛋白表达的影响。方法用1×10-7、5×10-7、1×10-6mol/L等不同浓度的5-Aza-CdR作用人肠癌RKO细胞72 h后,MTT法检测肠癌细胞生长及增殖抑制率;Transwell小室体外迁移和软琼脂克隆细胞集落实验观察肠癌细胞迁移以及增殖侵袭的状况;免疫组织化学染色(IHC)检测5-Aza-CdR作用前后肠癌细胞INK4家族基因(p15ink4b及p16ink4a/CDKN2)蛋白表达的状况。结果 MTT法示,与未经5-Aza-CdR作用的阴性对照组相比,肠癌RKO细胞分别经1×10-7、5×10-7、1×10-6mol/L不同浓度5-Aza-CdR处理后,均能明显地抑制肠癌细胞的生长,7 d时3实验组细胞抑制率分别为(40.70±0.54)%、(52.00±1.62)%和(62.62±1.40)%,差异有统计学意义(F=347.38,P<0.01);多组单因素分析,7 d时对照组分别与3实验组比较(t=62.538、47.457、62.398,P<0.01),差异均有统计学意义。Transwell小室穿膜实验显示,对照组细胞迁移数明显高于3个实验组,7 d时阴性对照组、1×10-7mol/L组、5×10-7mol/L组和1×10-6mol/L组细胞迁移数目分别为(67.4±7.2)、(35.3±4.6)、(29.5±7.3)、(25.3±6.2)个,差异有统计学意义(F=72.727,P<0.01);多组单因素分析提示,对照组分别与3实验组差异均有统计学意义(t=9.344,P<0.05;t=10.231、11.589,P<0.01)。软琼脂克隆实验表明,对照组、1×10-7mol/L组、5×10-7mol/L组和1×10-6mol/L组细胞集落数分别为:(36.8±5.1)、(32.4±7.2)、(21.3±5.4)、(19.5±6.4)个,差异有统计学意义(F=16.646,P<0.01);对照组分别与1×10-7mol/L组(t=2.020,P>0.05)、5×10-7mol/L组(t=5.354,P>0.05)和1×10-6mol/L组差异有统计学意义(t=6.382,P<0.05)。免疫组织化学染色显示,3实验组的人肠癌细胞p15ink4b及p16ink4a/CDKN2蛋白表达有明显增强,呈黄色或棕黄色,阳性细胞增多。结论特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR能有效抑制肠癌细胞的生长增殖侵袭和迁移,激活INK4家族(p15ink4b及p16ink4a/CDKN2)基因的表达可能是其机制之一。