猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

作者：杨锐; 杭洁; 王凡; 张世民; 邓瑞雪; 常艳燕; 张勇^*; 张克山^*

来源：中国兽医科学, 2023, 53(03): 346-351.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0057

• 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• N蛋白
• 可溶性表达
• 单克隆抗体

为了制备重组猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）N蛋白的单克隆抗体，首先，通过在N基因序列5′端添加标签序列，构建重组表达质粒pET28a-PRRSV-N，将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，诱导表达重组PRRSV N蛋白；然后，将重组蛋白免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合、筛选和亚克隆，制备单克隆抗体并鉴定。SDS-PAGE结果显示，在诱导温度为16℃、0.1 mmol/L IPTG、诱导时间12 h时，可以表达大小约19 ku可溶性的重组N蛋白；Western-blot分析也证实，重组N蛋白能与PRRSV阳性血清反应；通过间接ELISA筛选得到2株能稳定分泌抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体细胞株（4G2、2E5）；单抗亚型鉴定表明，单克隆抗体均为Ig G1亚型κ轻链；4G2、2E5细胞的培养上清和相应腹水的ELISA检测抗体效价分别为：1∶1 600、1∶800和1∶51 200、1∶51 200。综上，成功制备了可溶性重组PRRSV N蛋白并筛选出特异性的单克隆抗体，这为进一步探究PRRSV N蛋白的结构和功能以及PRRSV诊断试剂的研制奠定了基础。

• 单位
  中农威特生物科技股份有限公司; 甘肃农业大学; 凉州区农产品质量安全监督管理站