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摘要
目的 建立基于实时荧光重组酶聚合酶扩增（RPA）的鼠疫耶尔森菌快速检测技术。方法 以鼠疫菌特异基因序列YPS723为靶标，设计实时荧光RPA引物探针并进行筛选；构建含有基因待检片段的重组质粒进行实时荧光RPA方法灵敏度的评价；将15种非鼠疫菌细菌基因组混合后进行实时荧光RPA方法特异性验证；将鼠疫菌基因组掺入人血清和小鼠全血中模拟自然感染状态，以评估实时荧光RPA检测的实用性。结果 筛选出的实时荧光RPA引物、探针在39℃条件下15 min内即可在便携装置上获得检测结果，最低检测模板质粒浓度为10拷贝/μl，与其他细菌无交叉反应且重复性良好。实时荧光RPA对人血清模拟样本和小鼠全血模拟样本中鼠疫菌基因组的检出限为50 fg/μl，且在模拟样本盲测中正确率达100%。结论 该研究开发了一种快速、便携、灵敏度高、特异性好的实时荧光RPA方法用于鼠疫菌的检测。
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