科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的研究Zn2+对PPR蛋白锌指结构域的原核表达、纯化过程的影响,并对Zn2+的作用机制进行了初步探索。方法采用分子克隆的方法构建PPR蛋白锌指结构域及其突变体的His-SUMO融合蛋白表达质粒,研究Zn2+对其原核表达及Ni-柱亲和纯化过程的影响,并利用快速诱导法对Zn2+的作用机制进行了初步探索。结果培养基中添加1 mmol/L Zn2+可明显提高融合蛋白的稳定性;亲和纯化时在上清中添加10 mmol/L EDTA可明显提高亲和纯化效率;Zn2+作用机制的初探实验表明只有Zn2+可作用于锌指结构位点,并帮助稳定锌指结构域。结论 Zn2+可作用于PPR蛋白的锌指结构位点,并使锌指结构变得稳定;在蛋白原核表达时添加一定浓度的Zn2+可明显提高蛋白稳定性。
-
单位东华大学; 生物工程学院
