持续性内切酶EG5C-1的改造及酶学性质

作者：吕科旻; 周雨朦; 吴斌^*; 何冰芳

来源：生物加工过程, 2022, 20(05): 500-506.

• 持续性内切酶
• 活性架构
• 蛋白质工程
• 酶学性质
• 纤维素酶

为了提高glycosyl hydrolase 5 (GH5)家族的持续性内切酶EG5C-1的催化活性，对EG5C-1进行同源建模和分子对接，分析确定了活性架构区域内的23个关键氨基酸残基，并通过丙氨酸扫描、饱和突变和组合突变等方法最终获得催化活性显著提高的突变体D70Q/S235W,并分析其酶学性质。结果表明：D70Q/S235W的最适反应温度为60℃,最适pH为6.0。以羧甲基纤维素钠(CMC)和微晶纤维素(Avicel)为底物进行水解产物分析，突变体D70Q/S235W的主要水解产物为纤维二糖和纤维三糖。本研究筛选获得催化活性和酶学性质显著提高的突变体，可为纤维素酶的蛋白质工程改造奠定基础。

• 单位
  南京工业大学