过表达CD47重组慢病毒的制备及表达

作者：常越; 唐翠; 徐辉; 曹相玫; 刘仲涛^*

来源：宁夏医科大学学报, 2022, 44(12): 1195-1199.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2022.12.002

• CD47蛋白
• 重组慢病毒
• 肿瘤

目的 构建hCD47基因重组慢病毒并观察其在人胶质瘤U87细胞中的表达。方法 采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因hCD47，采用双酶切实验鉴定重组慢病毒载体pLVX-hCD47-3flag-ZsGreen-Puro，接着进行慢病毒的包装，将质粒载体导入293T细胞观察转染效率。进一步获取慢病毒转染效率，将慢病毒干预HEK293观察转染效率，最后采用逐孔稀释梯度法检测病毒滴度。采用稳转细胞系的方法将构建好的hCD47重组慢病毒转入胶质瘤U87细胞中，倒置荧光显微镜下观察荧光强度及范围，Western blot检测CD47蛋白表达情况。结果 PCR以及酶切鉴定表明重组慢病毒载体克隆为阳性，病毒包装以及检测转染效率实验结果均显示较高的荧光强度，表明慢病毒被成功构建。病毒滴度检测结果显示为1×108TU·mL-1。Western blot结果显示，目的基因CD47在稳转hCD47重组慢病毒U87细胞中(hCD47)相比对照组(NC)表达升高。结论 成功构建能够体外有效转染U87细胞的hCD47慢病毒。

• 单位
  宁夏医科大学总医院; 基础医学院; 宁夏医科大学