CRX基因诱导Müller细胞源性干细胞定向分化为光感受器细胞的实验研究

作者：姬红培; 高照林; 熊宇; 姚飞; 宋伟涛; 张恩东; 周蓉蓉; 夏晓波^*

来源：中华眼科杂志, 2018, 54(12): 923-928.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0412-4081.2018.12.010

• Müller细胞
• 干细胞
• 分化
• CRX基因
• 光感受器

目的研究外源性视锥视杆细胞同源盒(CRX)基因是否能够诱导体外培养的视网膜Müller细胞源性干细胞向光感受器细胞定向分化。方法实验研究。体外培养、扩增出生5～7 d昆明小鼠视网膜Müller细胞, 通过无血清培养去分化为干细胞。采用免疫细胞化学法分别鉴定Müller细胞(GS和Vimentin)和干细胞(Nestin和Sox2)标志物的表达。取第2代祖细胞分为3个组:空白对照组、空载体组[采用只含绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒转染细胞]、CRX组(用含GFP+CRX基因的慢病毒转染细胞)。诱导分化7 d后, 采用q-PCR、免疫印迹法检测光感受器细胞标志CRX蛋白、视紫红质(Rhodopsin)、感光蛋白S-opsin的表达差异。组间均数的两两比较采用独立样本t检验。结果体外培养的Müller细胞96.03%±1.21%同时表达GS和Vimentin标志物, 去分化后表达干细胞标志物Nestin和Sox2。CRX诱导分化7 d, CRX和Rhodopsin表达均明显增加, 部分细胞发生神经元样改变。CRX组、空载体组及空白对照组CRX mRNA相对表达量分别为10.830±2.301、1.214±0.469、1.000±0.576, CRX组与空白对照组相比, 差异有统计学意义(t=1.57, P=0.02), 空载体组与空白对照组相比, 差异无统计学意义(t=0.29, P=0.84)。CRX组、空载体组及空白对照组Rhodopsin mRNA相对表达量分别为26.410±16.180、1.301±0.401、1.000±0.473, CRX组与空白对照组相比, 差异有统计学意义(t=4.15, P=0.01), 空载体组与空白对照组相比, 差异无统计学意义(t=0.49, P=0.80)。CRX组、空载体组、空白对照组CRX蛋白相对表达量分别为1.258±0.358, 0.471±0.168, 0.442±0.152。未检测到S-opsin的表达。结论 CRX基因能够诱导小鼠Müller细胞源性干细胞定向分化为视杆细胞, 表明Müller细胞可以作为视网膜光感受器细胞替代治疗的内源性种子细胞。(中华眼科杂志, 2018, 54:923-928)

• 单位
  中南大学湘雅医院; 贵州省人民医院