靶向人端粒酶逆转录酶小片段干涉RNA表达载体的构建和表达

作者：赵鹏; 郭永智; 傅震; 尤永平; 陈云祥; 陆小明; 鲁艾林; 刘宁; 孙天胜; 朱兵

来源：中华神经医学杂志, 2007, 6(3): 265-269.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2007.03.013

• 人端粒酶逆转录酶
• RNA干涉
• DNA表达载体

目的 构建靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的小片段RNA(siRNA)表达载体,为研究RNA干涉(RNAi)在哺乳动物细胞内抑制靶基因表达奠定基础.方法 根据siRNA靶点设计的原则运用相关软件设计靶序列并合成其表达框,连接人质粒载体pRNAT-H1.1/Neo,转染293T细胞,荧光定量RT-PCR和Westemblot法检测转染后293T细胞中hTERT表达.结果 重组质粒经测序鉴定证明hTERT siRNA转录模板完整、正确插入到pRNAT-H1.1/Neo质粒中,并筛选出一个抑制hTERT表达效率最高的序列,其hTERT表达仅达22.90%.结论 利用基因重组和荧光定量PCR等技术能成功构建并筛选出一个抑制效率最好的靶向hTERT的siRNA表达载体,为以hTERT为靶点的肿瘤基因治疗的后续研究奠定基础.

• 单位
  南京医科大学; 北京军区总医院