农杆菌介导的棕色棉胚珠离体培养遗传转化体系的建立

作者：丁一; 耿晓丽; 何守朴; 潘兆娥; 贾银华; 王立如; 吴立强^*; 杜雄明^*

来源：分子植物育种, 2021, 19(01): 218-223.

DOI：10.13271/j.mpb.019.000218

• 棕色棉
• 胚珠
• 农杆菌介导法
• 遗传转化
• 离体培养

本研究以棕色棉品种‘棕1-61’为受体材料,以茁-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)为报告基因,探索农杆菌介导离体培养胚珠的遗传转化条件。结果表明最适合的遗传转化条件是:1 DPA胚珠预培养4 d后,用针头进行扎孔处理形成伤口,在OD600为0.6～0.8的农杆菌菌液中侵染3 min,22℃黑暗条件下共培养20 h后转移至含500 mg/L卡那霉素的BT培养基上进行暗培养。GUS染色结果发现,暗培养20 d的胚珠和30 d的纤维上均有染色,证明GUS报告基因转化成功。进一步将目的基因Gh UFGT构建RNAi载体并进行转基因,荧光定量PCR检测发现转基因阳性胚珠中Gh UFGT基因的表达量与对照相比显著下降。该实验为研究纤维发育和色泽相关基因的功能提供了一种快速高效的遗传转化方法。

• 单位
  中国农业科学院棉花研究所; 河北农业大学; 棉花生物学国家重点实验室