日本脑炎病毒NS1蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立

作者：杨克露; 裴超; 刘朝霞; 周登元; 曹胜波; 陈焕春; 宋云峰^*

来源：农业生物技术学报, 2020, 28(07): 1322-1330.

• 日本脑炎病毒
• NS1蛋白
• 单克隆抗体
• 双抗体夹心ELISA

日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)是危害人民健康的一种重要人畜共患病原,仍然缺乏敏感性高的抗原检测方法。NS1蛋白是JEV表达的一种分泌性蛋白,是该病毒诊断的理想靶标。本研究用构建的非结构蛋白1 (non-structural protein 1, NS1)单克隆抗体,建立了可检测NS1蛋白的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(double antibody sandwich ELISA, DAS-ELISA)方法。用针对JEV NS1蛋白不同位点的单克隆抗体杂交瘤细胞株(5H2和2F6)制备腹水,经Protein G纯化后,以5H2包被酶标板作为捕获抗体,HRP标记的2F6为检测抗体。ELISA条件优化的结果显示,捕获抗体和酶标抗体最佳浓度分别为25和2.296μg/mL。用该方法检测系列稀释的NS1蛋白,蛋白浓度范围在78.125～625.000 ng/mL时,检测OD450值和蛋白浓度之间具有良好的线性关系,说明该方法可用于NS1蛋白的定量检测。用该方法检测猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒等均显示阴性,说明特异性良好。重复性试验结果显示,该方法批内重复性为0.7%～2.6%,批间重复性为0.6%～2.1%。用该方法检测了JEV感染的小鼠(Mus musculus)脑组织匀浆,在小鼠发病期可明显检测到NS1蛋白。本研究建立了检测JEV NS1蛋白的ELISA方法,为该病毒的诊断提供了一种工具。

• 单位
  华中农业大学