水曲柳原生质体分离初探

作者：王姿童; 宋悦悦; 刘林; 薛佳丽; 詹亚光; 齐凤慧^*

来源：生物技术, 2021, 31(02): 183-188.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2021.02.0028

• 曲柳
• 原生质体
• 细胞活力
• 酶液组合

[目的]通过优化限制因素,探索水曲柳原生质体制备的最佳方法。[方法]采用酶解法,对影响原生质体分离的影响因素,设计正交实验,通过显微镜观察计数比较原生质体的分离效果。[结果]在M7和M9的酶液组合对原生质体分离效果最好,产量分别为6.61×105个/g和5.76×105个/g,活力分别为97.57%和97.07%。在11%的渗透压中原生质体产量最高。pH 5.2时产量最高,pH值增加不利于原生质体产量增加。酶解时间对原生质体产量差异显著,虽然14 h产量最高,但6 h、8 h、12 h、14 h之间产量差异不显著。[结论]采用酶解法初步获得了水曲柳原生质体分离的最适条件,在预处理3 h,渗透压为11%,在1.5%纤维素酶+0.8%离析酶+0.4%半纤维素酶中,pH值为5.2,黑暗条件下酶解14h。

• 单位
  东北林业大学; 生命科学学院