一种载体构建的新方法:重组融合PCR法

作者：邝翡婷; 袁定阳; 李莉; 李新奇

来源：基因组学与应用生物学, 2012, (06): 634-639.

• 重组融合PCR
• 载体构建
• 定点突变
• 原核表达载体 Recombination-fusion PCR
• Vector constructing
• Site-directed mutagenesis
• Prokaryotic gene expression vector

本研究介绍一种多目的片段一步重组克隆的载体构建的新方法。该方法要求在PCR引物设计时,在第一个目的片段上游引物的5'端和最后一个目的片段下游引物的5'端各设置16bp与线性化目标载体末端同源的序列,再在各目的片段之间的引物上各设计25bp的重叠序列,以便进行融合PCR将多片段扩增成融合片段。此方法将融合片段与线性化骨架载体进行一步重组、转化和重组子鉴定。该方法只要求骨架载体上有一个特异性酶切位点,特别适用于插入片段中含有较多限制性酶切位点的载体构建;该方法还可以引入定点突变,可便捷构建分析启动子功能等需引入定点突变的载体;该构建方法还可以实现多基因的无缝融合构建多顺反子,在构建原核基因表达载体...

• 单位
  杂交水稻国家重点实验室; 中南大学; 湖南杂交水稻研究中心