多花黄精块茎发育和胁迫条件下qPCR内参基因的筛选与验证

作者：杨阳; 叶碧欢; 宋其岩; 陈友吾; 胡传久; 杜国坚; 廖荣俊; 李海波^*

来源：中国中药杂志, 2020, 45(24): 5967-5975.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20200927.101

• 多花黄精
• 发育
• 茉莉酸甲酯
• 内参基因
• 实时荧光定量PCR

为分析多花黄精块茎中甾体皂苷生物合成通路基因的表达,筛选出块茎不同发育期以及在胁迫条件下稳定表达的内参基因至关重要。根据业已建立的多花黄精转录组数据库和相关报道的植物内参基因,以不同发育期和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate, MeJA)处理后的多花黄精块茎为实验材料,利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术,对8个候选内参基因包括histone H2A(H2A2),glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH),ACTIN,β-tubulin,ubiquitin-conjugating enzyme E2 10(UBQ-E2-10),elongation factor 1-alpha isoform(EF-1α2),18S rRNA(18S),α-tubulin 4进行系统的筛选;利用GeNorm,NormFinder,BestKeeper 3个统计学软件对内参基因的稳定性进行分析;通过分析甾体皂苷生物合成通路中4个基因的表达,对内参基因的可靠性进行验证。结果显示,以UBQ-E2-10作为内参基因时,4个甾体皂苷合成相关基因在不同发育期块茎中的表达情况,以及在受MeJA胁迫处理后块茎中的表达情况与以EF-1α2作为内参基因时的表达情况具一致性,表明UBQ-E2-10和EF-1α2均可作为合适的qPCR内参基因用于多花黄精不同发育期和外界逆境胁迫下块茎的基因表达分析。该研究所筛选出的2个内参基因UBQ-E2-10和EF-1α2为后续探讨多花黄精甾体皂苷生物合成途径的分子机制奠定了基础。

• 单位
  浙江农林大学; 浙江省林业科学研究院