组蛋白去乙酰化酶2调节Nrf2乙酰化水平在脂多糖诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤中的抗氧化作用机制

作者：陈隆望; 罗以楠; 蔡文超; 李萌芳; 连洁; 赵光举; 洪广亮; 卢中秋; 邱俏檬^*

来源：中华急诊医学杂志, 2019, (03): 328-334.

• 组蛋白去乙酰化酶2
• 核因子E2相关因子2
• 脓毒症
• 脂多糖
• 氧化应激
• 丙二醛
• 超氧化物歧化酶

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylases,HDAC2)调节核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)乙酰化水平在脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤中的抗氧化作用机制。方法 常规培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,用不同浓度的LPS(10、100、1 000 ng/mL)刺激,分别在0、6、12、24及48 h时用CCK-8检测细胞活性,选择合适的浓度和时间点。常规培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,随机分为对照组、LPS组、HDAC2慢病毒干扰组(siRNA-HDAC2组)和HDAC2慢病毒过表达组(LV-HDAC2组)。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HDAC2和Nrf2蛋白表达水平,免疫共沉淀法检测Nrf2乙酰化水平,放线菌酮作用后检测Nrf2稳定性。化学比色法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性。采用SPSS 23.0统计软件,多组间比较采用单因素方差分析检验,组间两两比较采用LSD-t检验。结果 与对照组相比,LPS组HDAC2的蛋白表达水平升高(t=5.974,P=0.027),Nrf2乙酰化水平降低(t=7.223,P=0.002),Nrf2蛋白水平升高(t=2.929,P=0.043),Nrf2的蛋白稳定性升高,SOD活性下降(t=121,P<0.01),MDA含量升高(t=10.45,P=0.000 5)。与LPS组相比,过表达HDAC2后Nrf2乙酰化水平降低(t=11.29,P=0.000 4),Nrf2蛋白表达水平升高明显(t=3.194,P=0.033),Nrf2的蛋白稳定性升高,SOD活性升高(t=4.678,P=0.009),MDA含量下降(t=5.417,P=0.005 6),而下调HDAC2后呈现相反的趋势。结论 LPS刺激后Ⅱ型肺泡上皮细胞氧化应激加重,HDAC2可降低Nrf2乙酰化水平,提高Nrf2蛋白表达,减轻LPS引起的氧化应激。

• 单位
  温州医科大学附属第一医院