转染Podoplanin对口腔白斑细胞增殖和细胞周期的影响

作者：孙强; 严明; 周晓健; 李新明; 毛力; 陈万涛

来源：中华口腔医学杂志, 2010, 45(1): 6-10.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1002-0098.2010.01.003

• 白斑
• 口腔
• 细胞增殖
• 细胞周期
• Podoplanin

目的 探讨转染外源性Podoplanin基因对口腔白斑细胞增殖和细胞周期的影响,以证实Podoplanin在白斑癌变中的作用.方法 以口腔黏膜白斑细胞系Leuk-1、转染pCMV-Podoplanin表达质粒白斑细胞系A4-1和转染空白载体pCMV的白斑细胞系B4-1为细胞模型,应用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)检测转染目的基因后细胞中Podoplanin mRNA水平的变化.激光共聚焦显微镜和蛋白质印迹法观察转染目的基因后细胞中Podoplanin蛋白的定位和表达水平.甲基噻唑基四唑(MTT)法检测转染目的基因细胞增殖活性的变化.流式细胞仪检测过表达外源性Podoplanin后细胞周期分布的变化情况.结果 转染外源件Podoplanin基因的A4-1细胞,mRNA相对表达量为0.022,明显高于B4-1细胞的0.001及Leuk-1细胞的0.002(P<0.05);A4-1细胞Podoplanin蛋白表达水平较B4-1和Leuk-1细胞明显提高.免疫荧光结果表明,3种细胞的胞质及胞膜均可见Podoplanin蛋白的表达,A4-1细胞的蛋白表达量(绿色荧光强度)明显高于B4-1和Leuk-1细胞.细胞生长曲线分析结果表明,A4-1细胞生长速度明显高于Leuk-1细胞,A4-1接种后3 d增殖活性比Leuk-1细胞高40.4%(P<0.05).细胞周期检测结果显示,A4-1细胞处于G_2～M期比例为(24.89±4.55)%,明显高于B4-1[(4.13±5.24)%]和Leuk-1细胞[(4.69±7.42)%],P<0.05;A4-1细胞增殖指数(0.57±0.06)高于B4-1(0.41±0.04)及Leuk-1(0.40±0.02),P<0.05.结论 口腔白斑细胞过表达外源性Podoplanin蛋白后,细胞生长和增殖能力明显增强;Podoplanin町能是口腔白斑细胞癌变的关键基因之一.

• 单位
  上海市口腔医学研究所; 郑州大学第一附属医院; 上海交通大学医学院附属第九人民医院