33株抗心肌肌钙蛋白T(cTnT)的单克隆抗体制备、鉴定及应用

作者：胡月红; 陈自敏; 陈宇翔; 杨映晖; 魏淑英; 宋浏伟; 周国梁; 葛胜祥

来源：生物工程学报, 2016, 32(12): 1694-1703.

DOI：10.13345/j.cjb.160125

• 心肌肌钙蛋白T(cTnT)
• 急性心肌梗死(AMI)
• 单克隆抗体
• 化学发光

旨在制备抗心肌肌钙蛋白T(cTnT)的单克隆抗体(m Ab),对单抗进行初步评价鉴定,并建立(cTnT)的化学发光定量检测试剂。首先利用外购的cTnT抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规m Ab制备技术和间接ELISA法筛选m Ab,以表达和合成的cTnT片段对筛选到的m Ab进行表位鉴定。使用双抗体夹心ELISA方法筛选检测cTnT抗原的配对m Ab,并建立cTnT全自动化学发光定量检测试剂。使用220例临床标本评价该试剂与罗氏试剂的检测一致性,另外使用238例临床样本和784例体检人群样本评价该试剂的临床应用。我们成功筛选到33株稳定分泌抗cTnT抗体的杂交瘤细胞株,并对单抗的表位进行初步鉴定。我们筛选到能检测10 pg/m L cTnT抗原的配对m Ab E16H8和C8G11,并使用该配对研制出全自动化学发光定量试剂。该试剂与罗氏试剂相关系数r达到0.959 9,检测一致率95%,利用该试剂盒检测临床样本灵敏度为97.5%,特异性为99.15%,99%体检人群的cTnT浓度分布小于0.080 6 ng/m L,符合WHO对急性心肌梗死的定义标准。综上,初步建立了cTnT诊断优势表位单抗,并利用这些优势表位的单抗建立全自动管式化学发光定量检测试剂,与罗氏试剂检测结果符合率高。

• 单位
  厦门大学; 生命科学学院; 厦门大学附属第一医院