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摘要
目的:用Red介导的单链寡核苷酸体内同源重组结合限制酶切方法对pBR322-Red质粒中的DNA序列进行精确的缺失突变。方法:用合成的单链寡核苷酸打靶分子电击转化W3110(pBR322Red)宿主菌,利用Red提供的同源重组功能敲除从kil基因至N基因长约2100bp的DNA序列,并用kilN序列中含有的单一酶切位点XhoⅠ对混合质粒进行酶切,取酶切产物转化W3110感受态细胞,菌落PCR方法筛选重组阳性克隆。结果:在没有任何筛选标记的情况下,用菌落PCR方法从10个菌落中成功挑选出1个重组阳性克隆。结论:该方法操作简单、精确,能够避免引入新突变,为DNA序列的缺失突变提供了一种新方法。
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单位军事医学科学院; 厦门大学
