塞尼卡病毒VP1蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

作者：孟媛; 张金勇; 姜宇航; 于成东; 王政; 于桐; 李亭玉; 高旭^*; 鲁会军^*; 金宁一^*

来源：中国病原生物学杂志, 2020, 15(11): 1299-1309.

DOI：10.13350/j.cjpb.201112

• 塞尼卡病毒
• VP1蛋白
• 纯化
• 多克隆抗体

目的利用原核表达系统表达塞尼卡病毒(Seneca Valley virus,SVV)VP1蛋白,并用纯化的蛋白免疫小鼠,制备VP1多克隆抗体。方法 PCR扩增SVV VP1蛋白基因,并将其克隆至pET-28a(+)载体,构建pET-28a-VP1重组质粒。将重组质粒转化至BL21(DE3)pLySs大肠埃希菌,使用IPTG诱导表达目的蛋白并优化表达条件,利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化蛋白。用纯化后的蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,并用接毒后的BHK-21细胞进行Western blot验证。结果 PCR扩增SVV VP1目的基因片段为792bp,与预期相符。成功构建pET-28a-VP1重组质粒,转化至DE3后经IPTG诱导表达相对分子质量单位约为35×103的目的蛋白,以37℃、0.8mmol/L诱导剂诱导4h表达量最高,且重组蛋白以包涵体形式表达。用His标签Ni2+-NTA金属螯合蛋白质纯化柱纯化蛋白并免疫小鼠,制备的抗血清能与接毒后的BHK-21细胞裂解产生及纯化的VP1蛋白反应。结论原核表达了塞尼卡病毒VP1蛋白,制备了抗小鼠多克隆抗体,该抗体具有免疫反应性。

• 单位
  延边大学