耳蜗移植神经干细胞的培养和鉴定

作者：吴佳源; 刘俊^*

来源：听力学及言语疾病杂志, 2019, 27(04): 405-409.

• SD大鼠
• 神经干细胞
• 悬浮培养
• 鉴定

目的以SD孕鼠的胎鼠海马组织为原材料来分离培养神经干细胞,为后续干细胞移植实验奠定基础。方法分离3只孕14～15天的SD大鼠胚胎海马组织,用无血清培养技术悬浮培养神经干细胞,测量神经干细胞球的数量和直径。用免疫组化荧光技术检测其巢蛋白(Nestin)的表达;掺入5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu),并用免疫荧光双标技术观测神经干细胞的增殖状况。采用荧光染料Hoechest33342标记神经干细胞,然后用10%胎牛血清诱导其分化,用免疫组化荧光技术鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、星状胶质细胞特异性表达的胞浆蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、少突胶质细胞的特异性抗原2,3-环核苷酸磷酸二酯酶(CNP),以确定培养细胞为神经干细胞。结果用大鼠胚胎海马组织可以成功分离神经干细胞,并可以在体外培养下稳定增殖传代,培养的神经干细胞及经胎牛血清诱导分化后的神经干细胞,经免疫组化荧光技术鉴定后可成功表达特异性标志物Nestin、NSE、GFAP、CNP。结论以SD胎鼠海马组织为原材料分离培养的神经干细胞具有自我更新能力,并能分化成神经元、星状胶质细胞及少突胶质细胞,获取的细胞可用于干细胞移植。

• 单位
  东阳市人民医院; 浙江省中医院