环状RNA Ras同源家族成员T1靶向调控微小RNA-204-5p对人类乳腺癌细胞株7增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

作者：余银平; 王立中; 蔺嘉楠; 蒋威华^*

来源：中华实验外科杂志, 2023, 40(04).

• 微小RNA
• 增殖
• 侵袭
• 迁移
• 凋亡
• 乳腺癌

目的探讨环状RNA Ras同源家族成员T1(circ-RHOT1)及微小RNA-204-5p (miR-204-5p)在乳腺癌中的表达及其对人类乳腺癌细胞株7(MCF-7)细胞增殖、克隆形成、侵袭、迁移、凋亡及上皮-间充质转化过程的影响。方法定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测circRHOT1及miR-204-5P在乳腺癌细胞系(人源性)MCF-7以及正常乳腺上皮细胞(人源性)MCF-10A中的表达;双荧光素酶实验及qRT-PCR证明circRHOT1和mirR-20-5p的关系。采用噻唑蓝(MTT)实验, 克隆形成实验, 流式细胞实验, transwell侵袭实验, 划痕实验, 检测各组细胞的增殖、克隆形成、侵袭、迁移及凋亡能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞上皮间质标志物表皮钙黏蛋白(E-cadlherin)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达。采用t检验或单因素方差分析进行统计分析。结果 circRHOT1在乳腺癌细胞系MCF-7中的表达量显著高于乳腺正常上皮细胞MCF-10A(4.77±0.11比1.00±0.09, t=45.940, P<0.01)。miR-204-p在乳腺癌细胞系MCF-7中的表达量显著低于乳腺正常上皮细胞(0.32±0.03比1.05±0.01, t=10.330, P<0.01)。si-circROT1组的表达明显低于si-NC组(1.00±0.08比0.15±0.03, t=17.230, P<0.01)。si-circRHOT1组细胞的体外增殖能力明显低于si-NC组(24 h:0.73±0.05比0.58±0.04, t=43.517, P<0.05;48 h:1.15±0.10比0.82±0.06, t=4.901, P<0.01;72 h:1.68±0.18比1.08±0.12, t=5.003, P<0.01)、si-circRHOT1组细胞的集落形成能力明显低于si-NC组(77.69±13.54比27.82±5.76, t=5.872, P<0.01)、si-circRHOT1组细胞的侵袭及迁移能力明显低于si-NC组[30.82±8.77比72.68±11.78, t=4.935, P<0.01;(17.24±4.21)%比(67.77±8.02)%, t=9.661, P<0.01], si-circRHOT1组细胞的凋亡能力明显高于si-NC组(22.92±4.46比5.62±1.31, t=6.448, P<0.01)。si-circRHOT1组细胞E-cadherin的表达高于对照组(6.84±0.56比0.96±0.24, t=13.320, P<0.01), si-circRHOT1组细胞N-cadherin, vimentin的表达低于si-NC组(0.34±0.07比1.06±0.35, t=9.331, P<0.01;0.36±0.05比1.10±0.36, t=8.645, P<0.01)。circRHOT1可充当miR-204-5P海绵, 靶向抑制miR-204-5P表达;干扰miR-204-5P的表达可部分逆转circRHOT1介导的肿瘤抑制作用。结论 circRHOT1通过充当miR-204-5P海绵, 靶向调控miR-204-5p, 增强乳腺癌MCF-7细胞增殖、集落形成、侵袭、迁移并减轻细胞凋亡能力。

• 单位
  新疆医科大学附属肿瘤医院