表达食血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂的毕赤酵母菌株的构建

作者：刘堰; 苏畅; 宋小双; 汤雅岚; 包振鸿

来源：生物工程学报, 2009, (04): 566-574.

DOI：10.13345/j.cjb.2009.04.007

• 食血蝙蝠
• 纤溶酶原激活剂
• 毕赤酵母
• 高效表达
• 纤维平板法 vampire bat
• plasminogen activator
• Pichia pastoris
• high expression
• fibrin plate assay

食血蝙蝠(Desmodus rotundus)在吸食大型动物血液时能保持创口处血流的畅通。本研究根据食血蝙蝠唾液中发现的纤溶酶原激活剂(Bat-PA,另称DSPAα1)的全长基因序列(GenBank Accession No.J05082),首次在体外人工合成Bat-PA全长基因并亚克隆到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K上;转化毕赤酵母菌株GS115后,经甲醇诱导获得DSPAα1的分泌型表达,表达条带为47kD;通过抗G418浓度梯度筛选、毕赤酵母中小量表达后SDS-PAGE电泳检测以及纤维平板法测活,筛选出高表达的DSPAα1稳定菌株,对电泳中的目的蛋白条...

• 单位
  西南大学; 南京大学; 生命科学学院; 医药生物技术国家重点实验室