重组鸭α-干扰素的抗病毒活性

作者：王永娟; 郭艳丽; 吴植; 王安平; 郭长明; 吴双; 洪伟鸣; 秦枫; 朱善元^*

来源：江苏农业学报, 2019, 35(06): 1402-1406.

• 鸭
• α-干扰素
• 原核表达
• 纯化
• 抗病毒活性

本研究参考大肠杆菌密码子的偏好性,对GenBank中已经发表的鸭α-干扰素基因序列进行优化,人工合成后与原核表达载体pET30a-ELP连接,构建原核表达质粒pET30a-DuIFNα-ELP。将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中,IPTG诱导表达重组蛋白DuIFNα-ELP。根据类弹性蛋白多肽(ELP)具有温度敏感的可逆相变特性,通过重复可逆相变循环(ITC)纯化重组蛋白质;纯化的蛋白质主要以包涵体的形式存在,通过变性、复性处理后,采用细胞病变抑制法分别在MDCK/VSV和DEF/VSV中检测重组蛋白质的抗病毒活性。结果表明,合成的重组鸭α-干扰素基因能成功表达,重组蛋白DuIFNα-ELP分子质量约80 000,纯化后的重组蛋白质纯度约90%。通过抗病毒试验检测重组DuIFNα-ELP在MDCK/VSV系统中的抗病毒活性为1.0×106 U/ml,比活性为1.25×106 U/mg;在DEF/VSV系统中的抗病毒活性为1.0×107 U/ml,比活性为1.25×107 U/mg,比MDCK/VSV系统中活性高10个单位,验证了干扰素的抗病毒活性与受体细胞的应答可能存在一定关系。这一研究结果为鸭α-干扰素防治禽类病毒性疾病的探索奠定了基础。

• 单位
  江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室; 南京师范大学; 江苏农牧科技职业学院; 生命科学学院