雷可肽生物合成中LxmX的表达纯化与结晶

作者：程焯; 王业民; 郑舰艇; 陶美凤^*

来源：基因组学与应用生物学, 2021, Z3: 3027-3034.

DOI：10.13417/j.gab.040.003027

• 羊毛硫肽
• LxmX
• 蛋白纯化
• 结晶
• 硒代蛋白

雷可肽是一种对革兰氏阳性菌具有强抑制活性的第V类新型羊毛硫肽，其生物合成关键酶LxmX的蛋白晶体结构对雷可肽的生物合成机制解析至关重要。本研究构建了LxmX及其突变体LxmX’(S129/189M)的重组表达载体pPSUMO-lxmX和pPSUMO-lxmX’(S129/189M)，并优化了表达条件，最终以Escherichia coli BL21(DE3)/pGro7为宿主，在0.1 mmol/L IPTG 30℃条件下诱导表达。通过镍柱亲和层析、TEV酶切、superdex200柱层析纯化得到纯度较高的蛋白。利用坐滴法点晶，20℃培养，经过结晶条件初筛和优化，得到了符合衍射条件的晶体。研究结果为解析LxmX的结构和研究雷可肽生物合成机制奠定了基础。

• 单位
  微生物代谢国家重点实验室; 生命科学技术学院; 上海交通大学