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摘要
为阐明猪流行性腹泻病毒(PEDV) E蛋白诱导Vero-E6细胞内质网应激分子机制，采用RT-PCR方法扩增得到E蛋白基因，经XhoⅠ和BamHⅠ酶切后与同样酶切的p-EGFP-N1载体使用T4 DNA连接酶进行连接，成功构建了表达载体，与pCDNA 3.1-GRP78共转染Vero-E6细胞，通过激光共聚焦试验和Western blot验证E蛋白的细胞定位，并揭示其激活细胞内质网应激的分子机制。结果表明，通过共聚焦荧光显微镜证实E蛋白定位在细胞中，Western blot方法验证E蛋白可以上调Vero-E6细胞GRP78蛋白表达水平，诱导Vero细胞内质网应激。进一步采用Western blot验证E蛋白通过PERK-eIF2α信号通路激活未折叠蛋白反应。本研究为探究PEDV致病机制提供了新的思路。
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