多粘类芽孢杆菌新普鲁兰酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

作者：张春园; 张鸣明^*; 胡先望; 李素岳; 何海宁; 梁宁

来源：食品工业科技, 2020, 41(15): 119-128.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2020.15.019

• 新普鲁兰酶
• 多粘类芽孢杆菌
• 大肠杆菌
• 克隆和表达

为了使新普鲁兰酶基因在大肠杆菌中表达并实现高密度发酵生产,采用PCR方法从多粘类芽孢杆菌基因组DNA中扩增出新普鲁兰酶基因Npu,测序结果表明Npu基因全长2106 bp,编码515个氨基酸,与其他多粘类芽孢杆菌新普鲁兰酶基因序相似性高达99%。将Npu基因连接到质粒PMD18T上,构建了PMD18T-Npu vecter重组载体。将该重组载体转化到大肠杆菌BL21中,该酶基因在大肠杆菌细胞中获得活性表达,并能将酶蛋白分泌到胞外。重组菌株BL21 PGEX 4T-1-Npu具有较好的遗传稳定性,连续传代培养10代,菌株所产酶总酶活性仍保持在715 U;纯化后的酶液于25℃保存6个月酶活性仍保持在5427 U,于4℃保存12个月酶活性仍保持在5390.5 U。这是首次对来源于类芽孢杆菌属(paenibacillus)的普鲁兰酶进行报道,由于Npu具有较好的水解淀粉支链的能力,因此其在淀粉加工业以及洗涤业上应用前景良好。

• 单位
  甘肃省商业科技研究所有限公司