人早幼粒细胞cDNA文库中与GINS2发生相互作用靶蛋白的筛选和鉴定

作者：张曦; 潘玉卿; 余鑫; 郑亚婷; 郭成斌; 徐娜; 王良晓; 何亮^*; 杨丽^*

来源：吉林大学学报(医学版), 2021, 47(01): 66-72.

DOI：10.13481/j.1671-587X.20210109

• 白血病
• 人早幼粒细胞cDNA文库
• 酵母双杂交
• GINS2

目的:采用酵母双杂交系统筛选与人GINS2编码蛋白发生相互作用的靶蛋白,阐明其在急性早幼粒细胞白血病(APL)中的致病信号及相关机制。方法:采用热激法将诱饵质粒pGBKT7-GINS2与人早幼粒细胞cDNA文库质粒共同转化至酵母AH109感受态细胞中,筛选与GINS2编码蛋白相互作用的文库蛋白。利用多重报告基因检测和DNA测序对编码互作蛋白的阳性克隆进行生物信息学分析。结果:成功从文库中筛选到15个初始阳性克隆,其中10个能激活腺苷酸琥珀酸合成酶2(ADE2)和组氨醇氨基盐转移酶3 (HIS3)报告基因,13个能激活β-半乳糖苷酶(LacZ)报告基因。对10个能在SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade培养基中生长的阳性克隆行DNA测序和基本局部比对搜索工具(BLAST)比对分析后,除8和9号测序失败,其余8个阳性克隆分属8种不同的蛋白编码基因,分别是RNA结合基序蛋白39 (RBM39)、泛素样修饰因子激活酶1 (UBA1)、金属硫蛋白2 (MT2A)、线粒体钙离子摄入蛋白1 (MICU1)、N-乙基马来酰亚胺敏感性融合蛋白辅因子(NSFL1C)、脂肪酰基辅酶a还原酶1 (FAR1)、双特异性磷酸酶1 (DUSP1)和细胞表面抗原14 (CD14)。结论:成功筛选到与GINS2发生相互作用的8个功能蛋白,推测目的蛋白可能在细胞损伤、转录调控和增殖代谢等方面发挥重要作用。

• 单位
  昆明医科大学第一附属医院; 昆明医科大学第三附属医院; 云南省肿瘤医院