hTERT启动表达VacA基因的重组杆状病毒载体的构建

作者：罗彩凤; 涂晶晶; 张嘉文; 邵世和; 朱虹

来源：中国地方病防治杂志, 2016, 31(09): 966-969.

• 杆状病毒
• 空泡毒素A
• 人端粒酶逆转录酶启动子

目的构建人端粒酶逆转录酶启动子(hTERT)调控的、携带幽门螺杆菌细胞空泡毒素A(Vacuolatingcytotoxin A,VacA)基因的选择性表达重组杆状病毒。方法应用酶切、连接方法将hTERT连接于杆状病毒穿梭质粒pFastBacTMDUAL载体P10启动子序列之后,和SV40分别调控目的基因VacA的表达和终止;将重组穿梭质粒电转入DH10BacTME.coli感受态细胞,经转座重组获得重组杆粒Bacmid-VacA。利用脂质体Cellfectin~将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,包装重组杆状病毒。结果应用PCR验证、双酶切分析、序列测定等方法验证重组质粒基因片段连接正确无突变,通过转座重组获得携带有VacA基因片段的重组杆粒。结论携带VacA基因的选择性复制重组杆粒成功构建。

• 单位
  江苏大学