Ascl2转录调控人结肠癌上皮细胞内CDX2基因表达的研究

作者：钟小莉; 尚杨杨; 潘琼; 李姗姗; 刘韵; 叶钧; 宋丽丽; 赵晶京; 彭志红; 汪荣泉

来源：第三军医大学学报, 2014, 36(18): 1867-1871.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2014.18.023

• Ascl2
• CDX2启动子
• 结肠肿瘤
• 荧光素酶报告基因

目的探讨Ascl2对人结肠癌上皮细胞中CDX2基因的转录调控作用。方法预测CDX2启动子的转录因子结合位点,构建包含8个不同长度的CDX2近端启动子的荧光素酶报告基因质粒,分别命名为pGL3-CDX2-C1-8;将各质粒分别转染到shRNA-Ascl2/LS174T和shRNA-Ctr/LS174T细胞中,检测细胞中的双荧光素酶活性。采用染色质免疫共沉淀(ChIP)技术,用Ascl2抗体免疫沉淀与CDX2启动子区DNA片段相结合的Ascl2,PCR扩增CDX2启动子的特异性序列。结果转录因子数据库预测到CDX2近端启动子区含多个E-box结合位点和潜在的Nkx-2、GATA-1、CdxA、Sox-5、SRY等顺式作用元件。双酶切及测序结果证实pGL3-CDX2-C1-8重组质粒插入片段序列均正确。重组质粒在shRNAAscl2/LS174T细胞中的荧光素酶活性明显高于shRNA-Ctr/LS174T细胞(P<0.01)。随着CDX2启动子片段的缩短,荧光素酶活性呈升高趋势。ChIP实验证实在CDX2近端启动子存在与Ascl2相结合的片段,在shRNA-Ascl2/LS174T细胞中,Ascl2与CDX2启动子区域中-841-646、-291-134、-7+138片段结合的DNA片段明显少于对照shRNA-Ctr/LS174T细胞。结论 Ascl2在结肠癌上皮细胞中可能通过与CDX2近端启动子的直接结合而达到转录阻遏CDX2基因表达的目的。

• 单位
  第三军医大学西南医院