高氧暴露BPD小鼠模型中巨噬细胞焦亡的检测及意义

作者：涂子坤; 高雅静; 韩晓; 郭海艳; 周玉峰^*

来源：复旦学报(医学版), 2023, 50(06): 791-801.

• 支气管肺发育不良(BPD)
• 消皮素D(GSDMD)
• 巨噬细胞
• 焦亡
• 小鼠

目的 探讨巨噬细胞焦亡是否参与支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）的肺病理损伤。方法 40只足月新生小鼠随机分为空气（room air,RA）组和高氧（hyperoxia,HO）组，每组20只。建立慢性高氧诱导的BPD小鼠模型。HE染色评估小鼠的肺泡化情况；CD31免疫组化检测肺血管发育状况；Masson染色分析肺组织的纤维化程度；qRT-PCR检测肺组织中的炎症因子和趋化因子（Il6、Il1b、Mmp12、Ccl2、Ccl5、Il8）基因表达水平；ELISA检测血清和肺组织匀浆中的IL-1β水平；Western blot检测细胞焦亡通路的关键蛋白NLRP3、Caspase-1 p20、N-消皮素D(gasdermin D,GSDMD)、IL-1β表达；流式分析支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞比例；免疫荧光检测F4/80与NLRP3/Caspase-1/IL-1β的共定位；免疫组化分析AQP5的表达水平。结果 与RA组相比，HO组小鼠的肺泡化阻滞和肺血管生成障碍，肺纤维化显著增加；肺组织中促炎细胞因子的表达显著上调，细胞焦亡相关蛋白表达水平显著增加，血清和肺组织匀浆中IL-1β水平显著升高；支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞比例显著升高，肺组织中F4/80与NLRP3、Caspase-1、IL-1β均存在显著的免疫荧光共定位现象，AQP5阳性的肺泡Ⅰ型上皮细胞严重受损。结论 高氧诱导的BPD小鼠模型中，NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路过度活化，可能导致BPD的肺部病理损伤。

• 单位
  复旦大学附属儿科医院; 复旦大学