猪FKBP5蛋白的原核表达及鉴定

作者：龙熙; 柴捷; 潘红梅; 王金勇; 肖杰秋; 张廷焕^*

来源：中国畜牧杂志, 2021, 57(11): 95-103.

DOI：10.19556/j.0258-7033.20201105-06

• FKBP5
• 载体构建
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 鉴定

为了获得大量纯度较高的猪FKBP5重组蛋白,本实验通过构建FKBP5原核表达载体,以实现FKBP5蛋白的大量表达,并对其进行纯化及鉴定。以荣昌猪胸腺cDNA为模板,PCR扩增FKBP5基因CDS区后,将其与pET-28a连接,获得pET-28a-FKBP5重组表达质粒,并将重组质粒转化进大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,获得包含pET-28a-FKBP5重组表达质粒的蛋白表达菌株;利用IPTG诱导蛋白表达,SDSPAGE鉴定其表达情况,利用Ni柱亲和层吸法纯化蛋白,并对纯化的蛋白进行Western-blot鉴定。结果表明,实验成功构建了重组表达质粒pET-28a-FKBP5;表达产物SDS-PAGE和Western-blot鉴定结果显示,在51 ku附近出现特异性条带,表明纯化回收的蛋白确为目的蛋白;1 mmol/L的IPTG诱导2 h是诱导蛋白表达的最适条件。实验成功表达了大量纯度比较高的FKBP5蛋白,可为进一步研究FKBP5蛋白的生物学功能以及猪抗病育种研究提供理论依据。

• 单位
  重庆市畜牧科学院