肝素通过下调脂多糖诱导的NO和活性氧表达保护肾脏微血管内皮细胞

作者：李鑫; 梁英健; 张晓娟; 马晓春^*

来源：中华危重病急救医学, 2018, 30(05): 405-408.

• 肝素
• 脂多糖
• 肾脏微血管内皮细胞
• 活性氧
• 一氧化氮

目的观察肝素对脂多糖(LPS)刺激肾脏微血管内皮细胞(RMVECs)形态学改变及一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)表达的影响。方法采用三步梯度筛网法原代培养大鼠RMVECs, 取长势优异的3～4代细胞进行实验, 并分为空白对照组、10 mg/L LPS处理组和2.5、5、10 kU/L肝素预处理组(LPS刺激前0.5 h给予相应剂量肝素干预)。透射电镜下观察LPS刺激24 h细胞形态学改变;于LPS刺激5、15、30、45 min采用免疫荧光法检测RMVECs内ROS表达;采用硝酸还原酶法检测RMVECs内NO生成情况。结果①空白对照组RMVECs细胞膜完整, 细胞内线粒体和内质网清晰可见, 核膜完整, 核仁明显。LPS刺激24 h后, RMVECs细胞器空泡变性明显, 以线粒体为主, 且细胞膜产生大量微粒体。经10 kU/L肝素预处理后, 细胞器空泡变性明显减轻, 细胞膜形态稳定。② LPS刺激5 min即可在RMVECs细胞内检测到ROS表达和NO生成明显增加, 并随时间延长逐渐增加, ROS表达30 min达峰值, NO生成45 min达峰值, 与空白对照组同期比较差异均有统计学意义〔30 min ROS(平均荧光值):76.2±5.8比1.5±0.1, 45 min NO(μmol/L):70.3±8.6比1.8±0.1, 均P<0.01〕。随肝素剂量增加, 预处理RMVECs后细胞内ROS表达及NO生成逐渐减少, 以10 kU/L作用最明显, 与LPS处理组同期比较差异均有统计学意义〔30 min ROS(平均荧光值):16.8±1.7比76.2±5.8, 45 min NO(μmol/L):11.8±8.6比70.3±8.6, 均P<0.01〕。结论肝素可通过下调LPS诱导的NO、ROS表达和稳定细胞形态发挥保护肾脏内皮细胞的作用, 以10 kU/L作用最明显。

• 单位
  中国医科大学附属第一医院