C型禽偏肺病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立及应用

作者：陈基明; 张文; 赵长润; 何怡宁; 王海勇; 韦平; 韦天超; 磨美兰^*

来源：中国家禽, 2018, 40(17): 17-21.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2018.17.004

• C型禽偏肺病毒
• F基因
• SYBR Green Ⅰ
• 荧光实时定量PCR

根据GenBank发表的禽偏肺病毒(aMPV)F基因序列,设计一对特异性引物,建立C亚型aMPV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。对该反应体系进行条件优化,建立了标准曲线,并进行特异性、敏感性及重复性试验,然后将建立的方法应用于临床样品和攻毒样品的检测。结果显示:标准曲线循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系;建立的方法只能检测出C亚型aMPV,最低可以检测到0.8×101拷贝/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于4%。应用建立的方法对43份临床样品检测,结果显示均为阴性;对42份35日龄SPF鸡人工感染后1～21 d的气管和肺脏样品进行检测,结果显示攻毒样品均为阳性。因此,研究建立的特异、灵敏、重复性好的C型aMPV实时荧光定量PCR方法,既可适合于该病的早期诊断和流行病学调查,又为该病毒的致病机制研究提供技术支撑。

• 单位
  广西大学