猪多杀性巴氏杆菌可视化LAMP检测方法的建立

作者：许培文

来源：中国农学通报, 2018, 34(12): 146-150.

• 猪多杀性巴氏杆菌
• 外膜蛋白H
• 环介导等温扩增技术
• 检测

该研究旨在建立一种快速检测猪多杀性巴氏杆菌的LAMP方法。根据Gen Bank中猪多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因(omp H)序列,在其保守区域设计了多套LAMP引物,通过LAMP反应,评价其特异性和敏感性,并加入SYBR GreenⅠ,对其进行肉眼判定。结果显示:建立的LAMP方法在56℃水浴中1 h可对猪多杀性巴氏杆菌核酸进行高效扩增,在反应结束后加入SYBR GreenⅠ可肉眼进行判断;该方法具有很强的特异性,对其它相关猪病病原菌检测结果均为阴性;其DNA核酸的检测量为0.05pg,是PCR的100倍,显示出很高的敏感性。用建立的LAMP方法对5株猪多杀性巴氏杆菌阳性样品进行检测,结果表明LAMP法与PCR检测的结果是一致的。结果表明该研究建立了一种操作简便、快速、敏感、特异的可视化LAMP方法,适合在基层使用。