微小RNA-22-3p调控Kruppel样因子6表达对骨髓间充质干细胞心肌样分化的影响

作者：钟晓鸣; 张蕾; 姚新亮; 刘洪洋; 张媛; 万琪琳; 李彦明^*; 程冠昌

来源：中国医学科学院学报, 2023, 45(01): 1-8.

• 微小RNA-22-3p
• Kruppel样因子6
• 骨髓间充质干细胞
• 心肌样分化

目的 探究微小RNA-22-3p(miR-22-3p)调控Kruppel样因子6(KLF6)表达对骨髓间充质干细胞(BMSC)心肌样分化的影响。方法 分离并培养大鼠BMSC,将第3代BMSC分为对照组、5-氮杂胞苷(5-AZA)组、模拟物阴性对照组、miR-22-3p模拟物组、miR-22-3p模拟物+空载质粒组、miR-22-3p模拟物+KLF6过表达质粒组；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-22-3p及KLF6表达；免疫荧光化学染色法检测细胞结蛋白(Desmin)、肌钙蛋白T(cTnT)、间隙连接蛋白43(Cx43)表达；Western blot检测Desmin、cTnT、Cx43、KLF6蛋白表达；流式细胞术检测BMSC凋亡情况；采用双荧光素酶报告基因实验分析miR-22-3p和KLF6的靶向关系。结果 与对照组比较，5-AZA组BMSC中miR-22-3p(q=7.971,P<0.001)、Desmin(q=7.876,P<0.001)、cTnT(q=10.272,P<0.001)、Cx43表达(q=6.256,P<0.001)以及细胞凋亡率(q=12.708,P<0.001)显著增加，而KLF6 mRNA(q=20.850,P<0.001)及蛋白表达(q=11.080,P<0.001)显著降低；与5-AZA组和模拟物阴性对照组比较，miR-22-3p模拟物组BMSC中miR-22-3p(q=3.591,P<0.001;q=11.650,P<0.001)、Desmin(q=5.975,P<0.001;q=13.579,P<0.001)、cTnT(q=7.133,P<0.001;q=17.548,P<0.001)、Cx43表达(q=4.571,P=0.037;q=11.068,P<0.001)显著增加，而KLF6 mRNA(q=7.384,P<0.001;q=28.234,P<0.001)及蛋白表达(q=4.594,P=0.036;q=15.945,P<0.001)显著降低，miR-22-3p模拟物组细胞凋亡率显著低于5-AZA组(q=8.216,P<0.001);与miR-22-3p模拟物+空载质粒组比较，miR-22-3p模拟物+KLF6过表达质粒组KLF6 mRNA(q=23.891,P<0.001)及蛋白表达(q=13.378,P<0.001)显著增加，Desmin(q=9.505,P<0.001)、cTnT(q=10.985,P<0.001)、Cx43表达(q=8.301,P<0.001)显著降低，细胞凋亡率增加(q=4.713,P=0.029)。双荧光素酶报告基因实验发现KLF6是miR-22-3p的潜在靶基因。结论 miR-22-3p通过抑制KLF6表达来促进BMSC心肌样分化。

• 单位
  河南大学淮河医院