抑制KDM2A基因对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

作者：何济南; 孔红言; 向丹丹; 黄帅文; 宋启琴; 苗蕊; 黄加权^*

来源：解放军医学杂志, 2023, 1-12.

• KDM2A
• miR-29a-3p
• 肝细胞癌
• 增殖
• 侵袭和转移

目的　探讨抑制KDM2A基因对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的调控机制。方法　收集2014－2017年华中科技大学同济医学院附属同济医院收治的40例HCC患者的肝癌组织及其癌旁组织，体外培养人肝癌细胞株HepG2、Huh7、HCCLM3、MHCC-97H及正常肝细胞LO2，采用qRT-PCR及Western blotting检测KDM2A在肝癌组织及细胞中的表达情况。取Huh7细胞，设置(1)si-NC组(转染si-NC)与si-KDM2A组(转染si-KDM2A)；(2)mimic-NC组(转染mimic-NC)、miRNA-29a-3p mimic组(转染miRNA-29a-3p mimic)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)与miRNA-29a-3p inhibitor组(转染miRNA-29a-3p inhibitor)。采用qRT-PCR和Western blotting检测KDM2A的表达情况，CCK-8法检测细胞增殖能力，Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。采用在线数据库TargetScan、miRDIP、miRWalk、Starbase及miRDB预测KDM2A与miR-29a-3p的结合位点。将KDM2A 3’-UTR(WT)或KDM2A 3’-UTR(MUT)报告质粒分别与NC-miRNA或miR-29a-3p mimics共转染293T细胞48 h后，采用荧光素酶报告实验检测荧光素酶活性。结果　与癌旁组织相比，肝癌组织中KDM2A mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05)；与正常肝细胞LO2相比，肝癌细胞HepG2、Huh7、HCCLM3、MHCC-97H中KDM2A mRNA和蛋白相对表达量明显升高(P<0.05)。与si-NC组比较，si-KDM2A组Huh7细胞增殖、侵袭和迁移能力明显降低(P<0.05或P<0.01)。在线数据库TargetScan、miRDIP、miRWalk、Starbase及miRDB分析结果显示，miR-29a-3p与KDM2A存在结合位点。双荧光素酶报告实验结果显示，miR-29a-3p mimics可明显降低KDM2A-MUT荧光素酶活性(P<0.01)。过表达miRNA-29a-3p后，Huh7细胞中KDM2A mRNA和蛋白相对表达量下降(P<0.01)，细胞增殖、侵袭和迁移能力下降(P<0.05)；抑制miRNA-29a-3p的表达后，Huh7细胞中KDM2A mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05)，细胞增殖、侵袭和迁移能力增强(P<0.05)。结论　抑制KDM2A的表达可减弱人肝癌细胞Huh7的增殖和转移能力，而miR-29a-3p可能是KDM2A的上游调节因子，参与肝癌的发生发展。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院; 江汉大学