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摘要
目的：探讨ClC-3氯离子通道在高分化鼻咽癌CNE-1细胞突起形成中的作用。方法：采用免疫荧光技术（Alexa Fluor 488标记抗体）检测CNE-1细胞中ClC-3蛋白的分布；MQAE荧光探针检测细胞内氯离子浓度；吸附式单通道膜片钳技术记录氯离子单通道活动；采用FAM标记的siRNA转染细胞，实验分为对照组、阴性对照（NC） siRNA组和ClC-3 siRNA组；激光共聚焦显微镜观察转染后绿色荧光情况，流式细胞术检测转染效率，Western blot法测ClC-3蛋白的表达，倒置显微镜下观察CNE-1细胞突起形成情况。结果：ClC-3蛋白主要分布于细胞膜和细胞质，且在细胞膜突起形成部位明显聚集；细胞突起处MQAE荧光弱，氯离子浓度较高，而突起根部荧光强，氯离子浓度较低；突起根部记录到翻转电位为4.06 mV的单通道电流，在-120 mV钳制电压下，该通道电导约为78.4pS; siRNA转染细胞48 h后，ClC-3 siRNA组细胞ClC-3蛋白表达量显著降低（P<0.01），且ClC-3 siRNA组细胞无片状伪足伸出，而对照组和NC siRNA组细胞伸出明显的片状伪足；此外，3组细胞均有数量不等的丝状伪足形成。结论：ClC-3影响CNE-1细胞贴壁生长时胞膜伸出突起、形成片状伪足的过程。
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