氯喹对脂多糖诱导的Ⅱ型肺泡细胞损伤的影响

作者：朱莹莹; 张姣姣; 孙俊楠; 王海嵘

来源：内科理论与实践, 2021, 16(03): 197-201.

DOI：10.16138/j.1673-6087.2021.03.012

• 氯喹
• Ⅱ型肺泡细胞
• 细胞凋亡
• PI3K/Akt

目的:探究氯喹(chloroquine,CQ)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致Ⅱ型肺泡(alveolar typeⅡ, AT2细胞株损伤的影响。方法:用不同浓度LPS和CQ分别单独处理AT2细胞,用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力以筛选LPS和CQ的作用浓度。根据细胞处理情况将实验分为对照组(不做任何处理的细胞)、LPS组、CQ组和CQ+LPS组4组。用蛋白质印迹法检测各组裂解的胱天蛋白酶3、Bcl-2、Bax的表达和Akt的磷酸化水平。之后增加磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase, PI3K)/Akt信号通路抑制剂LY294002与LPS和CQ共同处理细胞,即LPS+CQ+LY294002组,通过蛋白质印迹法检测裂解的胱天蛋白酶3、Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果:用终浓度为1、10和50 mg/L的LPS作用24 h,当LPS浓度为50 mg/L时,AT2活力下降显著(P<0.05),故选择该浓度的LPS构建脓毒症细胞损伤模型。用终浓度0.5μmol/L和5μmol/L CQ作用4 h时,AT2细胞活力无明显改变(P>0.05),当CQ浓度达10μmol/L,AT2细胞活力开始下降,浓度越高,细胞活力下降越明显,故选择5μmol/L的CQ作为治疗浓度。用50 mg/L的LPS刺激后,细胞内裂解的胱天蛋白酶3表达增高,Bcl-2/Bax比值及Akt蛋白磷酸化减少;在加入5μmol/L的CQ后,裂解的胱天蛋白酶3含量下降,Bcl-2/Bax比值和Akt蛋白磷酸化显著增加;当加入LY294002后,CQ的作用被消除,Bcl-2/Bax比值减少,裂解的胱天蛋白酶3表达增高。结论:5μmol/L的CQ可以通过激活PI3K/Akt信号通路,抑制细胞线粒体凋亡,减轻LPS诱导的AT2细胞损伤。

• 单位
  上海交通大学医学院附属新华医院