Ⅰ型牛疱疹病毒VP22蛋白原核表达及多克隆抗体制备

作者：郭伟强; 段绪来; 解佳; 赵学亮; 刘英楠; 陈鸿军^*

来源：动物医学进展, 2023, 44(11): 20-25.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2023.11.020

• Ⅰ型牛疱疹病毒
• VP22蛋白表达
• 多克隆抗体制备

为制备Ⅰ型牛疱疹病毒(BHV-1) VP22蛋白抗体，选用国内分离株BHV-SHJS,在其UL49基因核酸序列第517至747位间设计引物扩增目的片段，构建pET-28a-UL49 (172-249 aa)原核表达载体，转化载体至BL21 (DE3)感受态细胞；经IPTG诱导表达并纯化VP22 (172-249 aa)融合蛋白后；用该融合蛋白作抗原，以皮下注射的方式免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体；经间接ELISA、Western blot及间接免疫荧光(IFA)方法检测其灵敏度和特异性。结果表明，表达的VP22蛋白以包涵体形式存在；ELISA测定结果显示，制备的VP22蛋白抗体效价达到1∶16 000;Western blot和IFA结果显示，制备的多克隆抗体能与BHV-SHJS VP22特异性结合，具有良好的反应原性。试验结果为后期BHV-1感染宿主细胞在机制方面的研究和VP22功能的探究奠定了基础。

• 单位
  中国农业科学院上海兽医研究所; 西北农林科技大学