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摘要
目的探讨人参皂苷元AD-1抗体内外肺纤维化的作用及其机制,为后疫情时代肺损伤保护作用的中药研发提供理论依据。方法体外实验利用脂多糖(LPS)10 mg·L-1刺激小鼠成纤维细胞L929 24 h,再分别给予AD-1 5,10和20μmol·L-1进行治疗,采用MTT法检测AD-1对LPS诱导的成纤维细胞增值毒性的影响;采用流式细胞术检测AD-1对LPS诱导的L929细胞凋亡的影响;采用划痕愈合实验检测AD-1对L929细胞迁移的影响;采用Western印迹法检测AD-1对LPS诱导的L929细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达水平。在体实验采用昆明小鼠单次博来霉素(BLM,3.5 mg·kg-1)气管灌注的方法建立小鼠特发性肺纤维化模型。术后随机分为对照组(对照组气管灌注等体积的生理盐水),BLM组,BLM+AD-1(5,10和20 mg·kg-1)组,BLM+醋酸泼尼松(PA,5 mg·kg-1)组,于术后24 h灌胃治疗,连续给药28 d后取材,计算小鼠肺系数,并采用ELISA法检测小鼠肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;采用Western印迹法检测α-SMA、转化生长因子β(1TGF-β1)、TIMP-1等纤维化因子的表达,并检测Bax、Bcl-2、β-连环蛋白和人沉默调节蛋白3(Sirt-3)等凋亡蛋白的表达。结果体外实验结果显示,AD-1可显著抑制LPS诱导的L929细胞增殖与迁移(P<0.01);与LPS(10 mg·L-1)组比,AD-1 5,10和20μmol·L-1均可显著降低Bax/Bcl-2比值改善LPS诱导的L929细胞损伤引起的细胞凋亡(P<0.01);10和20μmol·L-1组可显著增加MMP-2/TIMP-1比值(P<0.01),提示AD-2可能通过促进细胞外基质的降解从而改善LPS诱导的L929细胞损伤。在体实验结果显示,与BLM模型组相比,AD-1 10和20 mg·kg-1均能显著降低BLM诱导的小鼠肺系数增加(P<0.01);显著降低血清及肺泡灌洗液中HYP的表达水平(P<0.01),并体现出剂量依赖性;显著降低BLM诱导的α-SMA,TGF-β1及TIMP-1的表达增加(P<0.05);显著降低Bax/Bcl-2,p-P53和β-连环蛋白表达(P<0.01);显著增加Sirt3表达水平(P<0.01),提示AD-1对BLM所致小鼠肺纤维化具有抑制作用。结论 AD-1能够改善LPS诱导的成纤维细胞损伤及BLM诱导的小鼠肺纤维化,机制可能与改善正常肺细胞凋亡及抑制TGF-β1/α-SMA/Sirt3信号通路有关。
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