基于不确定度轮廓的大黄HPLC定量分析方法验证研究

作者：戴胜云; 詹书怡; 欧阳晓婕; 马双成; 郑健; 孙飞

来源：药物分析杂志, 2021, 41(12): 2202-2210.

DOI：10.16155/j.0254-1793.2021.12.19

• β-容度容忍区间
• 不确定度轮廓
• 定量分析
• 方法学验证
• 高效液相色谱
• 大黄

目的:本文借鉴准确度轮廓的研究思路,提出采用β-容度容许区间（β-CTI）建立基于不确定度轮廓（UP）的决策验证方法,并将该方法应用于大黄HPLC含量测定方法验证。方法:以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚5个成分色谱峰的分离度为优化目标,采用单因素实验对影响色谱分离效果的柱温、流动相比例等因素进行优化,确定最佳色谱分离条件。采用"3×5×4"型全析因实验设计获取HPLC验证数据,即实验分为3 d进行,每天1次,每次实验包含4个浓度水平,每个浓度水平进行5次重复实验。对采集的验证数据进行方差分析,通过计算β-CTI评估不同浓度的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚HPLC定量分析不确定度。以±10%为不确定度可接受限,建立UP对大黄5个成分的HPLC定量分析方法进行验证。结果:以甲醇-0.1%磷酸水溶液（83∶17）为流动相,在柱温25℃条件下,大黄5个化学成分色谱峰的分离度均大于1.5。芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚质量浓度分别在1.013～50.65、0.879～43.05、1.016～50.8、1.002～50.1、1.023～51.15μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚质量浓度分别在2.032～40.64、1.758～35.16、2.032～40.26、2.004～40.08、2.046～40.92μg·mL-1浓度范围内定量不确定度均小于10%,说明所建立的HPLC定量分析方法能够准确测定大黄中总蒽醌的含量。结论:UP方法操作简便,能全面、科学地评价分析方法的准确性,对提高定量分析验证方法的可靠性、降低应用风险具有一定的参考价值。

• 单位
  中国食品药品检定研究院; 国家中医药管理局; 广东药科大学