高盐促大鼠血管平滑肌细胞增殖的时效量效关系及相关机制

作者：刘娟; 商黔惠; 赵宇; 王晓春

来源：中华高血压杂志, 2017, 25(03): 264-271.

DOI：10.16439/j.cnki.1673-7245.2017.03.014

• +" name="keyword">高Na+
• 血管平滑肌细胞
• 增殖
• 时效关系
• 量效关系
• 血管紧张素Ⅱ
• 血管紧张素Ⅱ1型受体

目的比较不同Na+浓度及其作用时间促大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的差异,探讨高盐诱导VSMC增殖的可能机制。方法组织贴壁法培养原代VSMC,传至第四代去血清同步化1d,分别用139、141、144、147、150、153、156、159、162和165mmol/L的Na+干预1、2、3和4d后,MTT比色法和细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测VSMC增殖情况。选取促增殖最显著的盐浓度和作用时间,以Na+139mmol/L为对照进行后续实验。CCK-8法检测渗透压对VSMC增殖的影响;流式细胞仪分析VSMC增殖周期;免疫荧光染色和Western blot检测VSMC增殖细胞核抗原(PCNA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的表达情况;实时荧光定量PCR检测VSMC中血管紧张素原(AGT)、AT1R mRNA的表达。结果MTT和CCK-8结果显示,Na+153165mmol/L作用2、3d可促进VSMC增殖(Na+159mmol/L作用3d最明显);CCK-8检测渗透压对VSMC增殖结果显示,与Na+139mmol/L组比较,Na+159mmol/L细胞明显增殖[(1.21±0.16)%比(1.00±0.25)%,P<0.05],而甘露醇组与Na+139 mmol/L组比较差异无统计学意义;流式细胞仪分析VSMC增殖周期结果显示,Na+159mmol/L组G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例增多(均P<0.05);PCNA免疫荧光染色可见Na+159mmol/L组VSMC中PCNA阳性细胞核增加,Western blot结果显示Na+159mmol/L组PCNA蛋白表达明显增加(均P<0.05);实时荧光定量PCR显示,与Na+139mmol/L组相比,Na+159mmol/L组中AGT、AT1R mRNA表达增加(均P<0.05);Western blot显示,与Na+139 mmol/L组相比,Na+159 mmol/L组中AngⅡ、AT1R蛋白表达增多(均P<0.05)。结论高Na+(153165 mmol/L)作用23d能诱导VSMC增殖,且Na+159mmol/L作用3d增殖效应最为显著;作用机制可能与高Na+促进AngⅡ和AT1R表达有关。

• 单位
  临床医学研究所; 遵义医学院附属医院; 遵义医科大学