黄芩汤对LPS诱导的RAW264.7炎症细胞的抗炎作用

作者：刘雅清; 刘滨; 马旭冉; 王敦方; 冯雪; 杨伟鹏

来源：中国实验方剂学杂志, 2023, 29(07): 20-28.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221704

• 黄芩汤
• 炎症
• 核转录因子-κB(NF-κB)信号通路
• 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路
• Janus酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(STAT)信号通路

目的：以RAW264.7细胞为炎症模型，探究黄芩汤的抗炎作用机制。方法：制备黄芩汤，筛选对RAW264.7细胞的安全剂量；将RAW264.7细胞接种于24孔板中，先后加入黄芩汤和脂多糖（LPS），分别采用Griess法和酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定一氧化氮（NO）和白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)的含量；将RAW264.7细胞接种于6孔板中，设空白组、LPS组、LPS+黄芩汤组、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)抑制剂（PDTC）组、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）抑制剂（SB203580）组、细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂（PD98059）组、c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂（SP600125）组、Janus酪氨酸蛋白激酶（JAK）抑制剂（AG490）组，先后加入相应的抑制剂和黄芩汤，并经LPS刺激后，提取RNA和蛋白，分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测NF-κB p65、p38MAPK、ERK、JNK和JAK mRNA及蛋白的表达水平，探究黄芩汤通过调控NF-κB、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和JAK/信号转导及转录激活因子（STAT）信号通路发挥抗炎作用的机制。结果：与空白组比较，LPS刺激后，模型组细胞中NO、IL-6、TNF-α、PGE2的浓度明显增加（P<0.05,P<0.01），与模型组比较，加入黄芩汤后，NO、IL-6、TNF-α、PGE2分泌量有减少趋势（P<0.05,P<0.01）；与空白组比较，模型组细胞内p38 MAPK、ERK、JNK、JAK和NF-κB p65 mRNA及总蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01），与模型组比较，黄芩汤孵育后，炎症细胞内p38 MAPK、ERK、JNK、JAK和NF-κB p65总蛋白及mRNA的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）；同时各抑制剂组细胞内NF-κB p65总蛋白及mRNA表达均有下降趋势（P<0.05,P<0.01）。结论：黄芩汤能够通过NF-κB、MAPK和JAK/STAT信号通路抑制炎症反应。

• 单位
  黑龙江中医药大学; 中国中医科学院中药研究所