猪萨佩罗病毒VP1蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

作者：王羽茜; 牟春晓; 陈振海^*

来源：扬州大学学报（农业与生命科学版）, 2021, 42(06): 48-66.

DOI：10.16872/j.cnki.1671-4652.2021.06.008

• 猪萨佩罗病毒
• VP1蛋白
• 单克隆抗体
• 抗原表位

猪萨佩罗病毒(PSV)是一种小RNA病毒,在临床上多与猪流行性腹泻病毒、捷申病毒等引起混合感染。近年来,我国多个省份报道在猪体内分离到该病毒,因而有必要加强对PSV的相关研究。参照PSV-HuN2株序列,将VP1基因插入pGEX-6p-1中进行重组蛋白表达。将蛋白质溶液与弗氏佐剂混合,按照标准程序免疫6～8周龄BALB/c小鼠,第3次免疫后,小鼠眼眶采血,IFA鉴定抗体水平,选取抗体水平高的小鼠脾细胞进行细胞融合。使用IFA法筛选阳性杂交瘤细胞,经过2次有限稀释法亚克隆,最终获得1株PSV VP1单克隆抗体,命名为33-2A。通过IFA、WB、IP试验,33-2A均可与PSV结合。同时对该单抗的B细胞抗原表位进行鉴定,其所识别的抗原表位在PSV VP1蛋白第40—46位氨基酸,多肽序列为40PALTAAE46。结果显示,该单抗与猪萨佩罗病毒VP1蛋白具有良好的反应特异性,并且将其抗原表位与NCBI中上传的PSV毒株序列进行分析,33-2A可识别大多数PSV毒株,具有一定的广谱性。这一研究为猪萨佩罗病毒病原学及其新型疫苗的研制奠定了基础。

• 单位
  扬州大学