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摘要
[目的]获得紫心甘薯Ib MYB1基因上游启动子序列,对其进行生物信息学分析和功能验证。[方法]利用hi Tail-PCR技术克隆获得Ib MYB1基因5'端上游的一段DNA序列,命名为PIb MYB1。使用Plant CARE和PLACE在线软件对其进行生物信息学分析,并通过瞬时转化烟草叶片和稳定转化拟南芥植株进行GUS组织化学活性检测,以验证该启动子的功能。[结果]成功克隆获得了长度为2 183 bp的PIb MYB1片段,生物信息学分析结果表明该片段具有CAAT-BOX和TATA-BOX等启动子核心元件,还具有光、糖和赤霉素的响应元件以及MYB、b HLH等转录因子的结合位点。GUS组织化学活性检测结果表明,PIb MYB1(-2 183～-1 bp)和5'缺失突变体PIb MYB1F1 (-2 000～-1 bp)、PIb MYB1F2(-1 500～-1 bp)均能驱动GUS基因的表达。[结论]成功克隆获得了Ib MYB1基因的启动子序列,其驱动Ib MYB1基因表达的主要区域位于-2 183～-1 000 bp区段,该区域具有核心启动子元件、环境因子响应元件和MYB、b HLH等转录因子结合位点。
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