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摘要
目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对高糖诱导的晶状体上皮细胞(LEC)凋亡和自噬的影响。方法 本研究以糖尿病性白内障患者和年龄相关性白内障(ARC)患者晶状体前囊膜以及高糖和正常糖条件下培养的人晶状体上皮细胞株(SRA01/04)为研究对象。选取2021年10月至2022年3月在南通大学第二附属医院眼科确诊为白内障的患者20例，依据白内障类型分为糖尿病性白内障组(DC组)和ARC组，每组各10例，取患者晶状体前囊膜进行实验。将细胞分为正常糖组和高糖组，正常糖组培养基含5.5 mmol·L-1葡萄糖，高糖组培养基含25.0 mmol·L-1葡萄糖，处理24 h后进行实验。采用Western blot检测各组HMGB1蛋白的表达水平。利用siRNA技术对HMGB1进行敲降，将细胞分为正常对照组、scr-siRNA组和si-HMGB1组。正常对照组：不作任何处理；scr-siRNA组：加入等量的Lipofectamine 3000和scr-siRNA;si-HMGB1组：加入等量的Lipofectamine 3000和si-HMGB1。三组细胞均用含5.5 mmol·L-1葡萄糖的培养基培养48 h。采用实时荧光定量PCR实验检测HMGB1 mRNA的表达情况以验证敲降效率。随后将细胞分为正常糖组、高糖组、高糖+scr-siRNA组、高糖+si-HMGB1组。高糖+scr-siRNA组、高糖+si-HMGB1组细胞先进行相应转染，待收集细胞前24 h,正常糖组细胞用含5.5 mmol·L-1葡萄糖培养基培养，高糖组、高糖+scr-siRNA组、高糖+si-HMGB1组细胞用含25.0 mmol·L-1葡萄糖的培养基培养。采用Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)和自噬相关蛋白(LC3B和p62)的表达水平，采用TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果 DC组患者晶状体前囊膜HMGB1蛋白相对表达量为1.18±0.02,高于ARC组(1.00±0.02),差异有统计学意义(P<0.001);高糖组SRA01/04细胞中HMGB1蛋白相对表达量同样高于正常糖组，差异有统计学意义(P<0.001)。si-HMGB1组SRA01/04细胞HMGB1 mRNA相对表达量显著低于scr-siRNA组，差异有统计学意义(P<0.001)。高糖组SRA01/04细胞中促凋亡蛋白Bax的表达水平高于正常糖组，而抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平低于正常糖组，差异均有统计学意义(均为P<0.05)。敲降HMGB1后，高糖+si-HMGB1组SRA01/04细胞中Bax的表达水平低于高糖+scr-siRNA组，而Bcl-2表达水平高于高糖+scr-siRNA组，差异均有统计学意义(均为P<0.05)。高糖组SRA01/04细胞LC3II的表达水平高于正常糖组，而p62的表达水平低于正常糖组，差异均有统计学意义(均为P<0.05);HMGB1敲降后，高糖+si-HMGB1组SRA01/04细胞LC3II的表达水平低于高糖+scr-siRNA组，而p62的表达水平高于高糖+scr-siRNA组，差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 HMGB1可能通过调控LEC凋亡和自噬过程参与糖尿病性白内障的发生发展。
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