亚洲棉7号染色体分离及文库构建

作者：彭仁海; 刘玉玲; 刘方; 王春英; 黎绍惠; 张香娣; 王玉红; 王坤波

来源：棉花学报, 2012, (05): 379-385.

• 亚洲棉
• 显微切割
• 微克隆 G.arboreum
• microdissection
• microcloning

采用前低渗、酶解、后低渗和盖片轻压相结合的方法,建立了激光法分离二倍体亚洲棉石系亚1号单条染色体技术。单染色体经去蛋白、酶切和PCR扩增后,产物以Southern杂交、简单重复序列(Simple sequencerepeats,SSR)引物扩增和荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization,FISH)进行验证,构建了棉花单条染色体文库。克隆片段长度在150~1000 bp,平均为550 bp;文库包含1.38×105个克隆,覆盖染色体长度1倍左右,空载率为1%,滴度为1.3×106pfu.mL-1,单一拷贝和低拷贝比例达到59%以上,为该条染色体分子标...

• 单位
  中国农业科学院棉花研究所; 棉花生物学国家重点实验室; 安阳工学院