新型鸭呼肠孤病毒群特异性抗原蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

作者：罗丹; 杨伏春; 高立; 李凯; 祁小乐; 高玉龙; 刘长军; 张艳萍; 崔红玉; 潘青; 王笑梅^*

来源：中国家禽, 2020, 42(11): 27-32.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2020.11.006

• 新型鸭呼肠孤病毒
• 群特异性抗原蛋白
• σB
• 多克隆抗体

为制备新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)群特异性抗原σB的多克隆抗体,研究采用RT-PCR方法扩增NDRV-SD19/6201株σB基因编码序列,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot鉴定结果显示,NDRV群特异性抗原σB获得高效表达,重组蛋白分子量约55 ku,该重组蛋白具有良好的免疫活性,能与His-标签抗体及NDRV阳性血清发生特异性结合反应。以纯化的重组蛋白免疫新西兰兔,获得高效价多克隆抗体,效价1∶12 800以上;间接免疫荧光试验表明,多克隆抗体能特异性识别多株NDRV毒株,具有较好的免疫反应活性。研究为建立NDRV血清学诊断方法提供了材料,同时为探究σB蛋白生物学功能奠定了基础。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所